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技術文章

分析細胞因子選購的四要素點擊次數:1102 更新時間:2017-04-18

   免疫系統是相當嘈雜的,B細胞與巨嗜細胞溝通,巨嗜細胞與T細胞交流,而T細胞則與免疫系統的所有成員通訊。細胞間交談的語言是細胞因子,包括趨化因子和生長因子在內的各種細胞因子共同介導著機體內的細胞間通訊。
  細胞分泌出的細胞因子,是能夠誘導細胞增殖、生長或分化等多種生理學反應的蛋白小分子,其中包括白介素、干擾素等免疫系統調節子,成纖維細胞生長因子FGF、血管內皮生長因子VEGF等生長因子,以及CCL2、CXCL8那樣的趨化因子(趨化因子誘導細胞遷移或趨化性)。對這些小分子蛋白進行研究有多種工具,人們可以通過抗體檢測、ELISA、定量RT-PCR以及生物活性實驗來檢測蛋白的豐度和活性。
  在這些研究中往往需要用到純化的細胞因子,來刺激體外培養的細胞或者作為ELISA實驗中的陽性對照。現在市面上有大量的細胞因子可供選擇,我們可以方便地在各大供應商的上進行搜索。那么如何才能從中選到的蛋白產品呢,以下四個方面不可忽視。
  有些蛋白需要經過翻譯后修飾才具有活性,哺乳動物細胞可以提供這樣的修飾,但細菌細胞往往不能。因此,在選購這類蛋白時應該特別留意產品說明書中的蛋白來源。例如,R&D公司的人TGF-beta 1蛋白是在中國倉鼠卵巢細胞中制備的,其人CCL2蛋白則是在大腸桿菌E. coli中制備的。
  蛋白的形式
  重組生長因子通常有兩種形式:含牛血清白蛋白BSA或不含BSA,選擇哪一種*取決于實驗的需要。據eBioscience公司的資料介紹,BSA是一種穩定劑,含BSA的蛋白可以作為ELISA實驗中的理想標準品。而當BSA可能影響實驗結果時可以采用不含BSA的蛋白,carrier-free形式的蛋白尤其適用于活體實驗。
  生物活性和應用
  不論買什么,選擇質量放心的產品總沒錯。聲譽好的公司會對其蛋白產品進行各種質控,以確保蛋白的品質和實驗效果。他們往往會在說明書中提供蛋白純度、內毒素含量、SDS-PAGE結果圖等多種數據。
  在選擇蛋白產品時生物活性也是需要考慮到的因素。舉例來說,R&D公司用趨化因子CCL2處理轉染了人CCR2A的BaF3小鼠pro-B細胞和培養了兩日的人類單核細胞,以此衡量CCL2的趨化能力。而eBiosciences用TGF-beta 1來抑制IL-4誘導的HT-2細胞增殖,從而檢測TGF-beta 1的生物活性。
  生物活性往往以units/ml或ED50(能引起50%zui大反應強度的量)為單位,需要注意的是不同實驗的ED50并不相同,供應商們不可能把蛋白的每種應用都一一測試全。我們需要在供應商列出的應用清單中尋找我們所需要的實驗信息。
電話:
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